《最终诊断》周五黄昏765隐蔽、狡猾、善变

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   【最近在忙新书，还有本职工作，所以修改会慢一点，大家可以等完本再看】
    放疗RT是肺癌必不可少的治疗方式。对于不适合手术的和期肺癌患者，根治性放化疗是治疗标准，这一点已被广泛接受。不幸的是，放疗后肿瘤的再生长是成功控制疾病的主要障碍。
    临床前研究表明，放疗对原发部位和转移部位的肿瘤免疫微环境具有双重作用。一方面，局部照射有可能激活针对远离照射区域的肿瘤细胞的全身免疫反应，即远隔效应，由在年首次报道。RT促进肿瘤抗原从垂死的肿瘤细胞中释放，上调类表达，并增加多种细胞因子和免疫效应分子的表达，包括白细胞介素IL-1、细胞间粘附分子和血管细胞粘附分子，所有这些都有助于由辐射引发的持久和全身抗肿瘤免疫。另一方面，放疗促进了肿瘤细胞的免疫逃避。例如，RT上调多种免疫抑制细胞因子的表达，如肿瘤坏死因子-αTNF-α、IL-6、IL-和转化生长因子-βTGF-β。促进免疫抑制细胞的积累，例如肿瘤相关巨噬细胞TAM、调节性Treg细胞和髓源性抑制细胞MDSC。辐射增强免疫检查点的活性，如程序性细胞死亡蛋白PD-1/PD-L1、细胞毒性淋巴细胞相关蛋白、细胞免疫球蛋白和含粘蛋白结构域的蛋白TIM3，和淋巴细胞激活基因LAG3。
    为了克服放疗的免疫抑制作用，已经提出并测试了免疫疗法和放疗的各种组合。在研究中，标准放化疗后加入可延长期患者的无进展生存期和总生存期。研究的巨大成功不仅改变了期非小细胞肺癌的临床指南，也引起了其他免疫疗法与结合的极大兴趣。
    的积累和激活在免疫抑制的建立中起关键作用。对的确切影响是复杂的。大分割照射抑制的积累和浸润，而较低剂量的照射往往会促进募集到肿瘤中。此外，临床前和临床研究表明，胃肠道肿瘤，包括结直肠癌和肝癌，在放疗后相对容易出现水平降低，而在其他肿瘤模型和临床环境中，如胶质瘤、肺癌、乳腺癌、头颈部鳞癌、前列腺癌和宫颈癌，导致数量持续增加。蔡等人首次报道的-表达被辐照上调。然而，关于的确切作用，尤其是其潜在机制，在辐照后塑造方面知之甚少。
    是一组具有强大免疫抑制能力的异质髓细胞。根据表型和形态，又可分为多形核PMN-，又称粒细胞型和单核型M-。
    免疫抑制活性是的关键标志。的抑制机制包括诱导型一氧化氮合酶iNOS、精氨酸酶1ARG1和吲哚胺2，3-双加氧酶IDO的表达，以及一氧化氮NO和活性氧ROS的产生。这些不同的机制不会同时起作用。人们普遍认为PMN-和M-通过不同的机制调控TME。此外，PD-L1的上调也被认为是辐射招募的免疫抑制机制之一。目前，对于辐照诱导的对TME的影响及放疗的治疗效果尚无一致的结论。
    磷酸二酯酶-5PDE5抑制剂，如西地那非和他达拉非，可以阻断环磷酸鸟苷cGMP的水解。最新数据表明，抑制剂能够通过抑制荷瘤TB小鼠和患者中和的活性和表达来促进抗肿瘤免疫。然而，抑制剂如何影响的亚群以及和抑制剂的组合是否会延迟辐射后的肿瘤再生尚未得到测试。
    我们最近的研究表明，消除招募的会延迟放疗后路易斯肺癌LLC的再生。在这里，我们报告了局部照射通过促进PMN-的增殖及其随后向的募集而削弱了抗肿瘤免疫力。ARG1的上调和激活是照射后PMN-介导的T细胞抑制的主要机制。西地那非与放疗的组合通过抑制过表达和-募集消除了辐射衍生的免疫抑制。
    在小鼠和癌症患者中，随着肿瘤的生长而扩增。的两个亚群之间的比例取决于特定的肿瘤模型和微环境。为了监测同源模型中的丰度，我们通过免疫表型分析确定了接种后肿瘤的生长以及小鼠中不同时间点的总体及其亚群。
    如图1C所示，肿瘤组织中总的百分比随着肿瘤的发展而稳步增加，从接种后第一周肿瘤浸润淋巴细胞的不到10%（5.84±1.22%）上升到第四周超过20%（±%）（P
为了更好地了解的全身分布，我们还研究了在外周血、脾脏和骨髓中的比例。仅在接种LLC细胞一周后，TB小鼠外周血中的MDSC百分比是无瘤小鼠的两倍±4.62%±0.93%，
-是肿瘤细胞、、巨噬细胞和树突状细胞表达的最重要的检查点分子之一。为了确定小鼠的-表达是否与健康小鼠不同，我们通过流式细胞术测试了的-表达。结果表明，TME中上PD-L1的平均荧光强度（MFI）从在细胞接种后的第一周±逐渐增加到第四周的1，±（
在脾脏和骨髓中，随着肿瘤的发展，的比例也显著增加，其模式与肿瘤组织和外周血中的相同。此外，我们在TB小鼠中观察到明显的脾肿大，这与我们观察到的在脾内聚集一致。
    为了确定局部照射对肿瘤生长和的影响，当肿瘤直径达到时，我们使用大分割RT治疗皮下LLC肿瘤。放疗导致肿瘤进展延迟长达一周，在第7至第10天的最小体积约为，但此后肿瘤开始再生。根据放疗前后肿瘤生长曲线，我们选择放疗后第3天为再生前生长，放疗后1周为肿瘤体积最小时为再生开始，放疗后2周和3周为再生阶段。肿瘤组织苏木精-伊红染色显示，与未治疗的肿瘤相比，放疗后的肿瘤中有更多的浸润性炎症细胞。随后的特异性免疫组化染色显示，大多数炎症细胞是+髓系细胞，这表明局部照射可能导致的积累。为了证实我们的假设，我们在局部照射后的不同时间点对总和这两个亚群进行了流式细胞术分析。局部照射后，放疗后肿瘤浸润的比例比未治疗肿瘤高2倍=±3.29%±3.00%，P
为了确定受照射肿瘤中PMN-的逐渐积累是否有助于肿瘤的再生长，或者这种积累是否仅仅是肿瘤生长的结果，使用抗Ly-单克隆抗体来消耗抗Ly-6G抗体的应用显着降低了肿瘤部位和外周血中PMN-MDSC的频率（P
虽然PMN-利用一系列机制来抑制抗肿瘤免疫反应，这涉及到许多免疫细胞和细胞因子，但对CD8+T细胞的抑制无疑是最重要的。为了确定后-诱导的免疫抑制是否依赖于+细胞，我们通过流式细胞术评估了+细胞的数量和功能。
    如图所示，+细胞的百分比随着照射从±%下降到±0.62%P
表达未观察到显着变化。当抗Ly-6G抗体被给予辐照小鼠时，IFN-γ分泌达到与未处理的小鼠相同的水平（±3.55%），而与辐照小鼠进行比较抗Ly-6G抗体处理后的PD-表达没有变化小鼠。因此，在这部分我们建议PMN-通过抑制+细胞促进放疗后肿瘤的再生。PMN-不仅抑制了中+细胞的数量，而且还抑制了其活性。
    为了确定辐照诱导的抑制机制，我们进行了免疫组化染色及iNOS和ARG1活性检测。肿瘤切片的免疫组化染色显示，局部RT增强了ARG1的表达，但没有增强iNOS的表达。ARG1活性测定表明，局部照射显著提高了ARG1的活性，从提高到P
-L1的表达是的一种新型免疫抑制机制。然后我们询问PD-上调是否是后介导的免疫抑制的机制之一。通过流式细胞术分析辐照后中-的表达。图显示，与未处理组相比，受照射肿瘤的中的PD-表达在照射后不久显着增加（照射后第三天：=±±，P
以上数据表明ARG1表达的上调是照射后PMN-抑制功能的合理机制。然而，不涉及-和的调节。为了进一步证实这一假设，在辐射后通过灌胃给予抑制剂nor-NOHA。-有效地将活性从降低到（P
后给予nor-NOHA显着增加CD8+T细胞比例（+nor-NOHA=%，
我们的结果表明，RT通过上调肿瘤内PMN-的百分比和活性来促进肿瘤免疫逃避。推测抑制PMN-及其活性可能是一种新的抗肿瘤策略是合理的。越来越多的证据表明，抑制剂可以抑制小鼠和癌症患者中和的活性和表达。因此，通过灌胃给予西地那非，以研究它是否可以促进的抗肿瘤作用并阐明潜在机制。如图所示，正如我们预期的那样，西地那非延迟了照射后的肿瘤再生长，这与阳性对照Nor-相当。的免疫特征表明，当给予西地那非时，肿瘤内PMN-的比例从±4.24%下降到±2.38%。
    此外，西地那非也显着降低了的表达。为了进一步检查西地那非对的抑制是否真的导致抗肿瘤免疫增强，我们分析了肿瘤内+细胞的比例和活性。流式细胞术分析表明+细胞的百分比从±%增加到±%。
    此外，当给予西地那非时，+细胞分泌的IFN-γ也显着升高。因此，我们证实抑制剂西地那非通过调节PMN-改善了照射后肿瘤免疫微环境。西地那非联合放疗可能是提高放疗疗效的一种有前景的策略。
    工作揭示了PMN-中ARG1通路介导RT后肿瘤再生的新机制，如图6所示。我们认为，PMN-是辐照招募的主要亚型，而不是M-。在广泛的免疫抑制机制中，ARG1的上调和激活是PMN-在放疗后抑制CD8+T细胞的主要机制。为了克服PMN-引起的免疫抑制，我们提出并证明，和RT联合使用降低了PMN-在TME内的募集和免疫抑制作用，激活了CD8+细胞应答，导致肿瘤生长延迟。综上所述，我们的研究结果为缓解免疫抑制TME以提高RT治疗效果提供了一种新的解决方案。虽然所有这些结果都是在LLC小鼠模型中进行的，但同样的机制是否适用于其他肿瘤模型尚不清楚。此外，在不同的辐射方案下，及其亚型如何影响TME仍未确定。因此，这些问题还需要进一步的研究来解决。
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